发布日期： 2024-04-17 09:59:29 来源：火狐体育葡萄牙合作下载
本讲以双抗体夹心法为例，具体论述ELISA的操作流程及技能关键，期望对科研朋友的试验有所协助。
2.1 试验开端前，请提早装备好一切试剂。试剂或样本稀释时，均需混匀，混匀时尽可能的防止起泡。
2.2 用户在初度运用试剂盒时，应将各种试剂管离心数分钟，以便管盖和管壁上的液体会集到管底。
2.3 在制造规范品、检测溶液作业液时，请以相应的稀释液制造，不能混杂。
2.4 span class=text-yellow因实践装量多于标明装量，制造作业试剂请用精准的计量东西（移液枪或量筒等）量取，切勿不经量取直接运用。
2.5 规范品、生物素符号抗体作业液、辣根过氧化物酶符号亲和素作业液稀释前依据预先核算好的每次试验所需的总量制造，实践制造时应多制造 0.1-0.4mL。请勿重复运用已稀释过的规范品、生物素符号抗体作业液、或辣根过氧化物酶符号亲和素作业液。
2.6规范品的稀释请勿于板中进行，规范品应于临用前15分钟内制造。为确保试验有用性，主张每次试验运用新的规范品。若保存妥当，溶解后的规范品 S7 可在 2-8℃ 保存，7 天内运用有用。3. 操作进程为确保检测成果的准确性，主张规范品及样本均设双孔测定。每次检测均需做规范曲线。引荐样本稀释计划：主张教师先做预试验探索样本最佳稀释倍数，然后再做正式试验。一切试剂和组分都先康复到室温，规范品、质控品和样品，主张做复孔。
3、设置规范品孔、样本稀释液孔、空白孔和样本孔，规范品孔各加不同浓度的规范品 50μL，样本稀释液孔加样本稀释液 50μL，空白孔不加，样本孔加待测样本 50μL。除空白孔外，每孔参加生物素抗体 100uL，用封板膜盖住反响板，37℃ 水浴锅或恒温箱避光温育 60min。
4、揭开封板膜，弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗刷液，静置1min，甩去洗刷液，吸水纸上拍干，如此重复 5 次。若运用主动洗板机，请按洗板机操作程序进行洗板，增加浸泡 30s 的程序，能大大的提高检测的精度。洗板完毕，加底物前，要在洁净不掉屑的纸上，充沛拍干反响板。
5、除空白孔外，每孔参加 HRP 符号亲和素 100uL，用封板膜盖住反响板，37℃ 水浴锅或恒温箱避光温育 20min。
7、将底物 A 和 B 按 1:1 体积充沛混合，一切孔中参加底物混合液 100μL。用封板膜盖住反响板，37℃ 水浴锅或恒温箱避光温育 15min。
8、一切孔参加停止液 50μL，在 450nm 波长酶标仪上读取各孔吸光度（OD值）。
4.2 如标本中待测物质含量过高，请先用样本稀释液进行稀释，以使样本契合试剂盒的查验测验规模，最终核算时再乘以相应的稀释倍数。
4.3 加样：加样时，请运用一次性的洁净吸头，防止穿插污染。加样时应尽量轻缓，防止起泡，将样本加于酶标板孔底部，切勿沿孔壁加样。一次加样时刻最好操控在 10分钟内，如标本数量多，引荐运用排枪加样。
4.4 温育：为防止样本蒸腾或污染，温育进程中酶标板有必要覆上板贴，试验进程中酶标板应防止处于枯燥的状况。温育进程中应随时调查温箱温度是否恒定于 37℃，及时作出调整。温育进程中，温箱不易敞开太屡次，避免影响温度平衡。
● 手艺洗板办法：吸去（不行触及孔壁和孔底）或甩掉酶标板内的液体；在试验台上衬托几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几回；将引荐的洗刷缓冲液按 200μL/ 孔注入孔内，浸泡 2 分钟。依据操作进程中所述，重复此进程数次。
4.6 显色：为确保试验成果的准确性，底物反响时刻到后应赶快参加停止液。可在参加底物溶液后每隔一段时刻调查一下显色状况以操控反响时刻（比方每隔 10 分钟）。当肉眼可见规范品前 3-4 孔有显着梯度蓝色，后 3-4 孔显色不显着时，即可参加停止液停止反响，此刻蓝色马上变为黄色。停止液的参加次序应尽量与底物溶液的参加次序相同。
4.7 底物溶液应为浅蓝色或无色，假如色彩严峻变深则有必要弃用。底物溶液易受污染，请避光妥善保存。