发布日期： 2024-04-02 13:31:06 来源：新产品展示
金益柏图文并茂教你ELISA试剂盒成果剖析1971年Engvall和Perlmann宣布了酶联免疫吸附剂测定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）用于IgG定量测定的文章，使得1966年开端用于抗原定位的酶标抗体技术发展成液体标本中微量物质的测定办法。这一办法的根底原理是：①使抗原或抗体结合到某种固相载体外表，并坚持其免疫活性。②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保存其免疫活性，又保存酶的活性。在测守时，把受检标本（测定其间的抗体或抗原）和酶标抗原或抗体按不同的进程与固相载体外表的抗原...
1971年Engvall和Perlmann宣布了酶联免疫吸附剂测定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）用于IgG定量测定的文章，使得1966年开端用于抗原定位的酶标抗体技术发展成液体标本中微量物质的测定办法。这一办法的根底原理是：①使抗原或抗体结合到某种固相载体外表，并坚持其免疫活性。②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保存其免疫活性，又保存酶的活性。在测守时，把受检标本（测定其间的抗体或抗原）和酶标抗原或抗体按不同的进程与固相载体外表的抗原或抗体起反响。用洗刷的办法使固相载体上构成的抗原抗体复合物与其他物质分隔，终究结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成必定的份额。参加酶反响的底物后，底物被酶催化变为有色产品，产品的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据色彩反响的深浅刊物定性或定量剖析。因为酶的催化功率很高，故可极大地扩大反响作用，然后使测定办法到达很高的敏感度。 金益柏ELISA试剂盒运用后得出成果该怎样剖析呢，今日为咱们介绍下 1. ELISA试验中样品都要做复孔或三孔，然后核算每个浓度
品的均匀OD值，复孔的变异系数应该小于20%。 2. 均匀OD值减去空白孔的OD值。 3. 制造规范曲线。 以减去本底后的OD值为X轴，规范品的浓度为Y轴，运用作图软件得出一个适宜的核算方法。主张运用适宜的软件来作图，比方CurveExpert 1.4。这款软件能够给出许多种办法(比方直线、半对数、对数、四参数方程等)并从中挑选一条最适宜的方程。要想查验某条曲线是否与表中数据符合，能够将规范品的浓度作为未知数，将对应的OD值带入该方程，核算出规范品的浓度，得到的成果应该与实践浓度很挨近(+/-10%)。挑选拟合度最高的那条曲线。 以下是CurveExpert1.4的运用的进程： 一将OD值和规范品浓度数据仿制张贴到表格中 二生成和挑选规范曲线 三经过曲线核算样品浓度 四输入OD值，点击“核算”按钮，得到样品的精确浓度。或许得到相关方程，经过excel来核算浓度。若需求导出方程，可点击“仿制”，张贴至excel中。 五关于OD值落在规范曲线之外的状况假如样品的OD值超越规范曲线的最高值，在试验前应该先将样品稀释然后得到精确的浓度。样品的终究度应该是核算出的浓度乘以稀释倍数。 夹心法 夹心法常用于检测大分子抗原，一般之操作进程为: 将具有专注性之抗体固著（coating）于塑胶孔盘上，完成后洗去剩余抗体 参加待测检体，检体中若含有待测之抗原，则其会与塑胶孔盘上的抗体进行专注性键结 洗去剩余待测检体，参加另一种对抗原专注之一次抗体，与待测抗原进行键结 洗去剩余未键结一次抗体，参加带有酵素之二次抗体，与一次抗体键结 洗去剩余未键结二次抗体，参加酵素受质使酵素呈色，以肉眼或仪器读取呈色成果 间接法 间接法常用于检测抗体，一般之操作进程为： 将已知之抗原固著于塑胶孔盘上，完成后洗去剩余之抗原。 参加待测检体，检体中若含有待测之一次抗体，则其会与塑胶孔盘上的抗原进行专注性键结。 洗去剩余待测检体，参加带有酵素之二次抗体，与待测之一次抗体键结。 洗去剩余未键结二次抗体，参加酵素受质使酵素呈色，藉仪器（ELISA reader）测定塑胶盘中的吸光值（OD值），以评价有色终产品的含量即可丈量待测抗体的含量。 竞争法 竞争法是一种较少用到的ELISA检测机制，一般用于检测小分子抗原，其操作进程为： 将具有专注性之抗体固著于塑胶孔盘上，完成后洗去剩余抗体 参加待测检体，使检体中的待测抗原与塑胶孔盘上的抗体进行专注性键结 参加带有酵素之抗原，此抗原也可与塑胶孔盘上的抗体进行专注性键结，因为塑胶孔盘上固著的抗体数量有限，因而当检体中抗原的量越多，则带有酵素之抗原可键结的固著抗体就越少，亦即，两种抗原皆竞相与塑胶孔盘上抗体键结，即所谓竞争法之由来。 洗去检体与带有酵素之抗原，参加酵素受质使酵素呈色，当检体中抗原量越多，代表塑胶孔盘内留下之带有酵素的抗原越少，显色也就越浅。 当需求侦测没有办法取得两种以上单一性抗体的抗原，或是不易得到满足的纯化抗体以固著于孔盘上时，一般会考虑运用竞争法ELISA。
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