发布日期： 2023-12-05 07:43:57 来源：火狐体育全站官网app
小鼠白细胞介素-2(IL-2)ELISA检测试剂盒本试剂仅供研讨运用标本：血清或血浆试验原理：IL-2试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA).已知IL-2浓度的规范品、不知道浓度的样品参加微孔酶标板内进行细心的检测。先将IL-2和生物素符号的抗体一起温育。洗刷后，参加亲和素符号过的HRP。再经过温育和洗刷，去除未结合的酶结合物，然后参加底物A、B，和酶结合物一起效果。发生色彩。色彩的深浅和样品中IL-2的浓度呈份额关系。试剂盒内容及其制造试剂盒成份(2-8保存)96孔装备48孔装备制造96/48块板(96T)半块板(48T)即用型塑料膜板盖即用型规范品：800pg/ml瓶(0.3ml)按说明书进行稀稀空白对照瓶(0.5ml)即用型规范品稀释缓冲液瓶(2.5ml)即用型生物素符号的抗IL-2抗体瓶(3.0ml)即用型亲和链酶素-HRP瓶(5.0ml)即用型洗刷缓冲液瓶(10ml)按说明书进行稀释底物A瓶(3.0ml)即用型底物B瓶(3.0ml)即用型停止液瓶(3.0ml)即用型标本稀释液瓶(6.0ml)即用型自备资料振动器及磁力搅拌器等。安全性不要用嘴汲取试剂盒里的任何成份。操作需求留意的几点运用一次性的吸头防止穿插污染，汲取停止液和底物A、B液时，避开运用带金属部分的加样器。底物A应蒸发，防止长期翻开盖子。底物B对光灵敏，防止长期露出于光下。防止用手触摸，有毒。试验完成后应当即读取OD依照说明书里边标明的时刻、加液的量及次序进行温育操作。样品搜集、处理及保存办法心10分钟将血清和红细胞敏捷小心肠别离。血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000g离心30分钟去除颗粒。细胞上清液---1000g离心10分钟去除颗粒和聚合物。安排匀浆-----将安排参加适量生理盐水捣碎。1000g离心10分钟，取上清液保存------假如样品不当即运用，应将其分红小部分-70保存，防止重复冷冻。尽可能的不可以运用溶血或高血脂血。假如血清中很多颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37或更高的温度加热冻结。应在室温下冻结并保证样品均匀地充沛冻结。试剂的预备规范品：规范品的系列稀释应在试验时预备，不能贮存。稀释前将规范品振动混匀。稀释份额按下表中进行：800pg/ml号规范品)原倍浓度不必稀释直接参加50ul。400pg/ml号规范品)100ul的原倍规范品参加100ul的规范品稀释液200pg/ml号规范品)100ul号规范品参加100ul的规范品稀释液100pg/ml号规范品)100ul号规范品参加100ul的规范品稀释液50pg/ml号规范品)100ul号规范品参加100ul的规范品稀释液25pg/ml号规范品)100ul号规范品参加100ul的规范品稀释液pg/ml(空白对照)原始浓度不必稀释直接参加50ul。洗刷缓冲液(50)的稀释：蒸馏水50倍稀释。操作过程运用前，将一切试剂充沛混匀。不要使液体发生很多的泡沫，防止加样时参加很多的气泡，发生加样上的差错。依据待测样品数量加上规范品的数量决议所需的板条数。每个规范品和空白孔主张做复孔。每个样品经过你自己的数量来定，能运用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1：1稀释后参加50ul参加稀释好后的规范品50ul于反响孔、参加待测样品50ul于反响孔内。当即参加50ul的生物素符号的抗体。盖上膜板，悄悄振动混匀，37温育1小时。甩去孔内液体，每孔加满洗刷液，振动30秒，甩去洗刷液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。假如用洗板机洗刷，洗刷次数添加一次。每孔参加80ul的亲和链酶素-HRP，悄悄振动混匀，37温育30分钟。甩去孔内液体，每孔加满洗刷液，振动30秒，甩去洗刷液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。假如用洗板机洗刷，洗刷次数添加一次。每孔参加底物A、B各50ul，悄悄振动混匀，37温育10分钟。防止光照。取出酶标板，敏捷参加50ul停止液，参加停止液后应当即测定成果。在450nm波利益测定各孔的OD主张运用的试验计划规范品浓度(pg/ml)800800样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品400400样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品200200样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品100100样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品5050样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品2525样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品限制号规范品以上的成果为非线性的，依据此规范曲线没办法得到准确的成果。试剂盒功能灵敏度：最小的检测浓度小于1号规范品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R重复性：板内、板间变异系数均小于10%。成果1、仪器值：于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD2、以吸光度OD值为纵坐标(Y)，相应的IL-2规范品浓度为横坐标(X)，做得相应的曲线含量可依据其OD值由规范曲线pg/ml