多功能DNA纯化回收试剂盒操作方法及步骤说明书

  多功能DNA纯化回收试剂盒操作方法及步骤说明书 ◆ TRIpure Reagent 抽提指南 ◆ 目录号 RP02 ◆ 使用手册 ◆ 实验室使用，仅用于体外 ◆ TRIpure Reagent 抽提指南 ◆ 目录号 RP02 ◆ 使用手册 ◆ 实验室使用，仅用于体外 ◆ TRIpure Reagent 抽提指南 ◆ 目录号 RP02 ◆ 使用手册 ◆ 实验室使用，仅用于体外   多功能DNA纯化回收试剂盒 目录号：DR03 ? 试剂盒组成、储存、稳定性： 试剂盒组成 保存 50次(DR0301) 10...

  ◆ TRIpure Reagent 抽提指南 ◆ 目录号 RP02 ◆ 使用手册 ◆ 实验室使用，仅用于体外 ◆ TRIpure Reagent 抽提指南 ◆ 目录号 RP02 ◆ 使用手册 ◆ 实验室使用，仅用于体外 ◆ TRIpure Reagent 抽提指南 ◆ 目录号 RP02 ◆ 使用手册 ◆ 实验室使用，仅用于体外   多功能DNA纯化回收试剂盒 目录号：DR03 ? 试剂盒组成、储存、稳定性： 试剂盒组成 保存 50次(DR0301) 100次 (DR0302) 200次 (DR0303) 平衡液 室温 5ml 10ml 20ml 溶胶/结合液DB 室温 50ml 100ml 200ml 漂洗液WB 室温 15 ml 25 ml 50 ml第一次使用前按说明加指定量乙醇 洗脱缓冲液EB 室温 10 ml 15 ml 20 ml 吸附柱EC 室温 50个 100个 200个 收集管（2ml） 室温 50个 100个 200个           本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。 ? 适合使用的范围： 适用于琼脂糖凝胶DNA回收、PCR反应产物纯化回收、酶切产物DNA片断纯化回收、探针标记后纯化回收、DNA样品浓缩等。 储存事项: 1. 所有的溶液应该是澄清的，如果环境和温度低时溶液可能形成沉淀，此时不应该直接用，可在37℃水浴加热几分钟，就可以恢复澄清。使用前应该恢复到室温。 2. 储存于低温（4℃或者－20℃）会造成溶液沉淀，影响使用效果，因此运输和储存均在室温下（15℃-25℃）进行。 3. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。 ? 产品介绍： 在高离序盐存在的情况下，DNA片断选择性的吸附于离心柱内的硅基质膜上，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤，漂洗液将引物、核苷酸、蛋白、酶等杂质去除，最后低盐、高pH值的洗脱缓冲液将纯净DNA从硅基质膜上洗脱。 ? 产品特点： 1. 离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。 2. 使用了优质溶胶液，不含传统溶胶液的碘化钠和高氯酸盐，不抑制回收后酶切、连接克隆等下游反应。 3. 独特的溶胶液/结合液配方，将溶胶和结合两种功能统一，因此一个试剂盒可以运用于琼脂糖DNA回收、PCR产物清洁纯化、酶切产物纯化回收等多种情况，节省了需购买多种试剂盒的费用。 4. 溶胶液/结合液调制成为了黄颜色，便于观察溶胶效果和监测pH值变化进而达到最佳结合效果，大幅度的提升回收效率。 5. 改进的溶胶液配方,大幅度的提升了缓冲能力和稳定能力，即使样品变化很大也能将PH缓冲在最佳结合范围内。 6. 快速、方便，不需要用有毒的苯酚、氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀。 ? 需要注意的几点 1. 所有的离心步骤均在室温完成，使用转速能够达到13,000rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。 2. 溶胶液/结合液中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要立即用大量清水或者生理盐水冲洗。 3. 回收纯化的DNA片段一般在100bp到40kb之间，过长、过短片段的回收效率迅速降低。 4. 回收DNA的量和起始DNA的量、洗脱体积、DNA片断大小有关。一般1-15μg， 100bp-5kb的DNA片段，回收率可高达85％－95％。 5. 切胶回收时，紫外灯观察对DNA片段有损坏作用，应该尽可能使用能量低的长波紫外线，并且尽可能的缩短紫外线. 洗脱液EB不含有螯合剂EDTA， 不影响下游酶切、连接等反应。也能够正常的使用水洗脱， 但应该确保pH大于7.5， pH过低影响洗脱效率。用水洗脱，DNA片段应该保存在－20℃。DNA片段若需要长期保存，可以用TE缓冲液洗脱（10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH 8.0），但是EDTA可能会影响下游酶切反应，使用时可以适当稀释。 ? 关于平衡液的使用 1. 介绍：核酸吸附硅胶膜柱子长期放置过程中会同空气中的电荷/尘埃发生反应而影响其核酸的结合能力。硅胶柱经平衡液预处理后可大幅度减少柱子中硅胶膜的憎水基团，提高核酸的结合能力。来提升硅胶柱子回收效率或者产量。平衡液是强碱性溶液，若不小心碰到，请用大量自来水清洗。用完后需盖紧瓶盖，以免接触空气。室温保存。在保存过程中可能有沉淀生成，请加热至37℃使沉淀完全消失。 2. 使用方法：取一个新的硅胶膜吸附柱子装在收集管中，吸取100μl的平衡缓冲液至柱子中。13000 rpm离心1分钟，倒掉收集管中废液，将吸附柱子重新放回收集管。此时平衡液预处理柱子完毕。接后续的操作步骤。 ? 操作步骤： 提示：第一次使用前请先在漂洗液WB中加入指定量无水乙醇，加入后请及时打钩标记已加入乙醇，以免多次加入! 1. 琼脂糖凝胶DNA回收： 1. 在长波紫外灯下，用干净刀片将所需回收的DNA条带切下，尽量切除不含DNA的凝胶，得到凝胶体积越小越好。 2. 将切下的含有DNA条带凝胶放入1.5ml离心管，称重。 先称一个空1.5ml离心管重量，然后放入凝胶块后再称一次，两次重量相减，得到凝胶的重量。 3. 加3倍体积溶胶/结合液DB。 如果凝胶重为100mg，其体积可视为100μl，则加入300μl溶胶液。 如果凝胶浓度大于2％，应加入6倍体积溶胶液。 4. 56℃水浴放置10分钟（或直至胶完全溶解）。每2-3分钟涡旋震荡一次帮助加速溶解。 5. 可选,一般不需要：每100mg最初的凝胶重量加入150μl的异丙醇，震荡混匀。 有时候加入异丙醇能大大的提升回收率，加入后不要离心。回收大于4Kb的片段时，不加入异丙醇，加入有时反而可能降低回收效率。 平衡液预处理吸附柱： 使用平衡液预处理硅胶膜吸附柱为必做步骤，具体方法参见前文“关于平衡液的使用” 6. 将上一步所得溶液加入吸附柱EC中（吸附柱放入收集管中），室温放置1分钟，12,000rpm离心30-60秒，倒掉收集管中的废液。 如果总体积超过750μl，可分两次将溶液加入同一个吸附柱EC中。 过滤下的溶胶/结合液和收集管内残存的强碱性平衡液混合后，溶胶液可能会从黄色变成橘红甚至紫色，此为酚红PH指示剂碱性条件下的正常颜色变化。 7. 加入600μl漂洗液WB （请先检查是不是已加入无水乙醇!），12,000rpm 离心30秒，弃掉废液。 8. 加入600μl漂洗液WB，12,000rpm离心30秒，弃掉废液。 9. 将吸附柱EC放回空收集管中，12,000rpm离心2分钟，尽量除去漂洗液，以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。 10. 取出吸附柱EC，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加50μl洗脱缓冲液EB（洗脱缓冲液事先在 65-70℃水浴中加热效果更好），室温放置2分钟，12,000rpm 离心1分钟。若需要较多量DNA，可将得到的溶液重新加入吸附柱中，离心1分钟。 洗脱体积越大，洗脱效率越高，若需要DNA浓度较高，可以适当减少洗脱体积， 但是最小体积不应该少于25μl，体积过小降低DNA洗脱效率，减少产量。 2. PCR产物或者酶切片段等DNA纯化： 1. 每100μl PCR扩增后体系或者酶切后体系加入500μl溶胶/结合液DB，充分混匀。（如果初始体系小于100μl，请事先用双蒸水调整至100μl）。 平衡液预处理吸附柱： 使用平衡液预处理硅胶膜吸附柱为必做步骤，具体方法参见前文“关于平衡液的使用” 2. 将上一步所得溶液加入吸附柱EC中（吸附柱放入收集管中），室温放置1分钟，12,000rpm离心30-60秒，倒掉收集管中的废液。 3. 从此步骤开始和琼脂糖凝胶DNA回收的操作步骤7-10完全一致，请参见琼脂糖凝胶DNA回收的操作步骤7-10。

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